斜纹夜蛾蜕皮激素受体与超气门蛋白的原核表达及活性检测

双酰基肼类杀虫剂模拟天然蜕皮激素作用影响幼虫蜕皮。昆虫蜕皮激素受体的高度敏感性和专一性要求必须建立新的杀虫活性检测技术, 以适应快速准确和大批量筛选的要求。本研究采用RT-PCR技术, 获取斜纹夜蛾Spodoptera litura蜕皮激素受体（EcR）与超气门蛋白（USP）功能域目的基因, 构建EcR、 USP功能区基因原核表达载体（pEHISEGFPTEV-EcR_cde和pEHISEGFPTEV-USP_cde）。载体经诱导表达和蛋白纯化, 获得EcR和USP功能区纯化蛋白。在蛋白浓度l mg/mL, ³H-PonA终浓度8 nmol/L的条件下, 采用放射性配基受体结合分析测定了4种药剂（虫酰肼、 呋喃虫酰肼、 抑食肼和灭幼脲）不同浓度下的放射性比活的变化。结果显示： 随着药剂浓度的逐渐增大, 前3种药剂的放射性比活都有不同程度的降低, 其中虫酰肼的放射性比活降低程度最大, 其次是呋喃虫酰肼和抑食肼, 灭幼脲的放射性比活基本无变化。这些结果表明相同条件下虫酰肼比呋喃虫酰肼和抑食肼有更高的杀虫活力, 本研究的方法可对双酰基肼类杀虫剂或者先导化合物进行初步筛选。     

50种热带地区植物对斜纹夜蛾的拒食活性

在室内测定了采自海南儋州两院本部及昌江霸王岭的26科50种热带地区植物56个样品的乙醇提取物对斜纹夜蛾四龄幼虫的拒食活性,结果表明：假药(根)、肉桂(叶)、密脉崖鹿角藤(叶)、牛筋果(叶)、鸦胆子(枝叶)、过江龙(枝叶)、牛心番荔枝(叶)等具有较高的拒食活性,其拒食率分别为92．50％、76．25％,、73．95％、57．50％、56．85％、56．58％、和50．42％。此结果为进一步从这些热带植物中提取、分离和纯化高活性的拒食作用活性成分奠定了基础。     

不同抗药性品系甜菜夜蛾呼吸速率的比较

以甜菜夜蛾Spodoptera exigua (Hübner)敏感品系(SS)及高效氯氟氰菊酯选育的抗性品系(RR)和近等基因系-抗性品系(NILs-RR)幼虫为试虫,在25±1℃,相对湿度70%,光照强度3 000 lx,光周期14L∶10D的条件下测定了3～5龄幼虫呼吸速率的变化。结果表明,抗性品系与敏感品系的同龄期甜菜夜蛾幼虫在不受药条件下的呼吸速率差异不显著,因此抗性水平的提高并未相应引起甜菜夜蛾本底呼吸速率的变化。高效氯氟氰菊酯处理幼虫后,各品系的呼吸速率均随剂量的提高而相应提高,以各品系相应LC₂₀和LC₅₀剂量处理后的呼吸速率,NIL_S-RR明显高于RR,两者又明显高于SS品系。两个抗性品系呼吸速率峰期均出现在药后5 h,而敏感品系出现在药后2 h;敏感品系保持较高呼吸速率的时间短,而抗性品系维持高水平呼吸速率的时间长,分别于药后15 h和24 h恢复到正常水平,这表明用药后抗性品系呼吸速率的提高幅度与代谢解毒能力存在一定相关性。     

保幼激素类似物对斜纹夜蛾核多角体病毒增殖的影响

分别用5×10⁶,1×10⁷,5×10⁷,1×10⁸ PIBs/mL 4种浓度的斜纹夜蛾核多角体病毒(SpltNPV)感染斜纹夜蛾末龄幼虫（第6龄）,并于同龄期以10μg/头的保幼激素类似物(JHA) methoprene分别对各感染组进行点滴处理,以研究JHA对SpltNPV增殖的影响。研究表明,与对照组相比各不同浓度处理组病毒总产量分别提高227.06%、128.71%、52.62%、33.15%,平均单头病毒含量分别提高49.15%、48.40%、36.40%和31.11%,病毒感染死亡率分别提高119.21%、52.72%、12.64%和1.12%。其中以1×10.7 PIBs/mL感染再经JHA处理的病毒总产量和平均单头病毒含量最高,分别为1 701.8×10⁸PIBs和60.1×10⁸ PIBs。各处理组的病毒总产量和平均单头病毒含量均显著高于其对照组。在此基础上,进一步研究了JHA对染毒与未染毒宿主消化生理的影响。结果表明,JHA处理不仅延长了6龄幼虫的寿命,增加了其取食量,而且还显著提高了幼虫的食物转化率和病毒产量。     

日本三株斜纹夜蛾核型多角体病毒的增殖特性及其多角体蛋白基因的序列分析

利用斜纹夜蛾Spodoptera litura培养细胞,对近年来在日本本州、九州和四国等地发现并筛选出的对斜纹夜蛾幼虫具有强烈杀虫活性的3株斜纹夜蛾核型多角体病毒(SpltMNPV)（K-3、G1-2和G10-3）进行了生物学活性和分子生物学的初步研究,克隆了多角体蛋白基因,并进行了序列分析和比较。结果表明:（1）SpltMNPV日本分离株K-3、G1-2和G10-3分别具有不同的特征性酶切图谱,分别属于3种基因型（A型、B型和C型）; （2）3个分离株的芽生型病毒（budded virus）产生能力和多角体产生能力有差异,免疫印迹分析表明,多角体蛋白的分子量也不同;（3）日本株SpltMNPV核型多角体蛋白结构基因由747个核苷酸编码序列（编码249个氨基酸）组成,其序列与中国株SpltMNPV的同源性为98.9%,与其他6种核型多角体病毒有较高的同源性（61.7%～74.2%）,但其5′端侧翼序列(nt-1～-100)与AcMNPV和BmNPV相比差异显著,在对该基因表达调控起决定性作用的8个高度保守核苷酸序列中（nt-44～-51）有2处发生自然突变。     

甜菜夜蛾抗氯氟氰菊酯品系相对适合度、抗性生化机理及抗性遗传方式

比较了甜菜夜蛾Spodoptera exigua 抗氯氟氰菊酯品系和敏感品系的繁殖和生长发育特征。结果表明：抗性品系幼虫发育历期延长、蛹重减轻、化蛹率和产卵量降低,抗性品系的适合度为0.61,抗性品系在繁殖和生长发育上存在明显的生存劣势。用两品系3龄幼虫分别测定胡椒基丁醚（PBO）、增效磷SV₁）、脱叶磷（DEF）和顺丁烯二酸二乙酯（DEM）对氯氟氰菊酯的增效作用,抗性品系增效倍数与敏感品系增效倍数之比分别为14.1、14.8、2.3和2.3倍,胡椒基丁醚和增效磷对氯氟氰菊酯增效作用最明显,表明多功能氧化酶参与了甜菜夜蛾对氯氟氰菊酯的抗性。抗性品系3龄幼虫酯酶和谷胱甘肽S-转移酶的活性分别为敏感品系的1.05倍和0.91倍, 抗性品系5龄幼虫多功能氧化酶O-脱甲基活性为敏感品系的1.05倍,两品系间3种酶的活性差异不显著,表明甜菜夜蛾对氯氟氰菊酯的抗性与酯酶、谷胱甘肽S-转移酶及多功能氧化酶O-脱甲基酶活性无关。用剂量对数死亡机率值回归线分析法研究甜菜夜蛾对氯氟氰菊酯的抗性遗传规律,表明甜菜夜蛾对氯氟氰菊酯的抗性为常染色体遗传、多基因控制;正、反交后代的显性度分别为0.61和0.43,抗性遗传为不完全显性。     

斜纹夜幼虫对食物中重金属Ni2+的积累与排泄

为明确食物中重金属离子在昆虫体内的分布和转移情况,本文采用等离子体原子发射光谱仪检测了植食性昆虫斜纹夜蛾Spodoptera litura Fabricius连续3个世代6龄幼虫对食物中过量Ni²⁺的排泄和积累情况。结果表明：大部分Ni²⁺可通过粪便排出体外;沉积在体内的Ni²⁺主要积累在中肠,部分Ni²⁺可通过中肠上皮细胞基底膜进入血淋巴,经由血淋巴的转运作用积累在脂肪体和表皮等组织中。6龄幼虫不同组织中所积累Ni²⁺的含量为中肠>脂肪体>表皮,且不同组织和粪便中的Ni²⁺都随饲料中Ni²⁺浓度的增加而增加,并存在显著的剂量-反应关系。研究结果可为进一步研究过量Ni²⁺对斜纹夜蛾幼虫的生长发育和繁殖的影响,以及斜纹夜蛾幼虫不同组织对Ni²⁺的解毒能力等提供一定依据。     

斜纹夜蛾抗药性监测及茚虫威对其解毒代谢酶的影响

【目的】斜纹夜蛾Spodoptera litura (Fabricius)是主要的农业害虫之一。本研究旨在明确该害虫在湖南省5个主要蔬菜种植区的抗药性水平,并探讨该害虫对茚虫威的抗性与解毒代谢酶活性之间的关系,为斜纹夜蛾有效防控及抗性治理提供依据。【方法】采用浸叶法测定了2014-2016年湖南5地斜纹夜蛾田间种群对10种杀虫剂的抗性水平;将斜纹夜蛾敏感种群3龄幼虫在死亡率40%~70%的选择压下用茚虫威进行汰选,比较了斜纹夜蛾敏感种群和抗茚虫威种群的羧酸酯酶、谷胱甘肽S-转移酶和多功能氧化酶对硝基苯甲醚O-脱甲基活性。【结果】湖南5地斜纹夜蛾田间种群对有机磷类杀虫剂产生了26.9~220.2倍的抗性,对氨基甲酸酯类杀虫剂产生了68.3~890.8倍的抗性,对拟除虫菊酯类杀虫剂产生了21.0~267.2倍的抗性,对相对较新型杀虫剂（甲维盐、阿维菌素、茚虫威和溴虫腈）产生了5.2~53.4倍的抗性。经茚虫威汰选后第14代[抗性倍数(resistance ratio, RR)=26.43]斜纹夜蛾羧酸酯酶、谷胱甘肽S-转移酶和对硝基苯甲醚O-脱甲基酶活性分别上升2.86, 1.01和1.83倍。【结论】斜纹夜蛾对多种药剂产生了不同水平的抗性,斜纹夜蛾幼虫羧酸酯酶和对硝基苯甲醚O-脱甲基活性增强可能是斜纹夜蛾对茚虫威的抗性上升的重要因素。     

草地贪夜蛾高致病力绿僵菌菌株的筛选与鉴定

为获取对草地贪夜蛾Spodoptera frugiperda具有高致病力的生防真菌，从福建省不同地区分离得到8株寄主为鳞翅目和半翅目幼虫僵虫的绿僵菌Metarhizium，采用浸渍法测定了其对草地贪夜蛾2龄幼虫和蛹的致病力，并根据形态学和分子生物学方法对高致病力菌株进行种类鉴定。结果表明，8株绿僵菌菌株对草地贪夜蛾2龄幼虫和蛹均表现出不同程度的致病力，其中菌株FJMR2和FJXY7表现出较强的致病力。在5×107个/mL孢子浓度下，FJMR2和FJXY7对草地贪夜蛾2龄幼虫的致死率分别为88.76%和82.13%，对蛹的致死率分别为86.57%和84.00%；对草地贪夜蛾2龄幼虫的LT50分别为4.81 d和4.93 d，对蛹的LT50分别为4.94 d和4.83 d。经鉴定菌株FJMR2和FJXY7均为莱氏绿僵菌Metarhizium rileyi。本研究获得2株对草地贪夜蛾2龄幼虫和蛹具有高致病力的莱氏绿僵菌菌株，在草地贪夜蛾的生物防治中具有较大应用潜力。     

Response of multiple generations of beet armyworm,Spodoptera exigua (Hübner), feeding on transgenic Bt cotton

Development, reproduction and food utilization of three successive generations of beet armyworm, Spodoptera exigua (Hübner), fed on transgenic and non‐transgenic Bt cotton were examined. Significantly longer larval life‐span and lower pupal weight were observed in three successive generations of S. exigua fed on transgenic Bt cotton compared with non‐transgenic Bt cotton. Significantly higher survival rate and adult fecundity of S. exigua were found in three successive generations of S. exigua fed on transgenic Bt cotton compared with non‐transgenic Bt cotton. The survival rate and adult fecundity of S. exigua were occurred significant increase in the third generation compared with the first generation after feeding on transgenic Bt cotton. Significantly lower consumption, frass and relative growth rate (RGR) were observed in three successive generations of S. exigua fed on transgenic Bt cotton compared with non‐transgenic Bt cotton. Cotton variety significantly affected all indices of larval consumption and utilization in three successive generations of S. exigua, except for efficiency of conversion of ingested food. However, beet armyworm generation only significantly affected RGR of S. exigua. The results of this study indicated food quality on the diet‐utilization efficiency of S. exigua was different along with beet armyworm generation. Measuring multigenerational development and food utilization of S. exigua at individual and population level in response to Bacillus thuringiensis (Bt) can provide a more meaningful evaluation of long‐term population dynamics than experiments on a single generation. It is imperative to develop an appropriate multigenerational pest management tactic to monitor the field population dynamics of non‐target pests (e.g., beet armyworm) in agricultural Bt cotton ecosystem.